تشخیص استافیلوکوک های گواکولاز مثبت به روش MPN

تشخیص استافیلوکوک های گواکولاز مثبت به روش MPN

استافیلوکوک ها باکتری های گرم مثبت، بدون اسپور، غیرهوازی اختیاری، غیر متحرک، کوچک و کروی شکل از جفت تا خوشه های انگور مانند هستند که نام استافیلوکوک از آن گرفته شده است (استافیل به معنی خوشه انگور). کواگولاز آنزیمی است که پلاسمای خون را لخته می کند. برخی گونه­ های باکتری استافیلوکوک این آنزیم را تولید می­ کنند. استافیلوکوکوس اورئوس شایع­ترین گونه استافیلوکوک کواگولاز مثبت است. استافیلوکوکوس اینترمدیوس و بعضی سویه­ های استافیلوکوکوس هاییکوس از دیگر سویه­ های تولید کننده کواگولاز هستند. این پاتوژن­ های فرصت طلب به طور گسترده در طبیعت پراکنده هستند و تأثیر عمده­ای بر سلامت انسان دارند. این باکتری­ ها مدت هاست که به عنوان یک میکروارگانیسم مشترک ساکن روی پوست و مخاط شناخته می شود و نقش مهمی در عفونت­های مکرر و بیماری­های مزمن دارند.

در صورتیکه تعداد استافیلوکوک­ها در نمونه کم باشد باید از روش بیشترین تعداد احتمالی (MNP) برای شناسایی و شمارش آنها استفاده کرد. در این آزمون براساس استاندارد ۳-۶۸۰۶ سلول ­های استافیلوکوک کواگولاز مثبت در نمونه مواد غذایی مورد استفاده انسان، خوراک دام و سایر نمونه­ های در تماس با مواد غذایی شمارش می­ شود. ابتدا هر رقت نمونه در سه لوله حاوی محیط جیولیتی کانتونی برای قابل شناسایی بودن تعداد کم استافیلوکوک کواگولاز مثبت غنی­سازی می­ شود. پس از گرم خانه ­گذاری در شرایط معین، به محیط برد پارکر آگار انتقال می­ یابد. محیط کشت برد پارکر آگار محیط انتخابی برای تشخیص و شمارش استافیلوکوک­های کواگولاز مثبت در غذا و خوراک دام است. این محیط کشت حاوی زرده تخم­ مرغ و پتاسیم تلوریت است که در برهمکنش با استافیلوکوکوس­های کواگولاز مثبت، ایجاد کلنی ­های سیاه یا خاکستری براق و محدب با هاله شفاف می­ کنند. در ادامه برای بررسی مثبت بودن کواگولاز کلنی ­های مشخص از آزمون کواگولاز استفاده می ­شود. در این آزمون کلنی­ها به محیط کشت آبگوشت عصاره مغز و قلب منتقل می­ شود. بعد از گرمخانه ­گذاری، مقدار معینی از آن با پلاسمای خرگوش مخلوط می ­گردد. در نهایت برای هر رقت تعداد لوله­ هایی که استافیلوکوکوس­های کواگولاز مثبت در آنها با محیط برد پارکر آگار و آزمون کواگولاز تایید شد، ثبت می­ شود و مقدار MPN از جداول MPN به دست می­ آید.