میکروسکوپ کانفوکال Confocal

میکروسکوپ Confocal یا میکروسکوپ روبشی هم کانون لیزری (کانفوکال) میکروسکوپی است که از خاصیت فلوئورسانس نمونه جهت تصویربرداری از آن استفاده می کند و امروزه بسیار مورد توجه قرار گرفته است. یکی از کاربردهای مهم میکروسکوپ کامفوکال در تصویربرداری از سلول ها و نمونه های زیستی است. ساختار سلول ها و بخش های خاص آن را پس از رنگ آمیزی با ماده فلوئورسانس می تواند با بزرگنمایی و کیفیت بالا مشاهده کرد. در مهامکس خدمت رسانی به صورت ساعتی بوده و محققین پس از آماده سازی و تعیین طول موج تهییج می توانند در زمان لازم تصویربرداری خود را انجام دهند.

شرایط خاص و نکات مهم میکروسکوپ کانفوکال Confocal

هزینه برای تصویربرداری برای یک ساعت است.
ليزرهای دستگاه در محدوده فرابنفش و مرئی قابلیت تهییج دارند. با اين حال بهترين نتيجه برای گرفتن عكس بهتر زمانی است كه محدوده تهييج رنگ مورد نظر شما با طول موج های دستگاه (405,488,532,635nm) همخوانی داشته و يا نزديك به اين طول موج‌ها باشد. برخی از رنگ‌های متداول برای عكس‌برداری عبارتند از: FITC (Flourescein Iso Thiocyanate) ،PI (Propidium) Iodide برای اطلاعات بیشتر در مورد Fluorephoreها به لینک زیر مراجعه کنید: https://en.wikipedia.org/wiki/fluorephore. لازمه عكس ميكروسكوپ كانفوكال، داشتن تصوير قابل قبول از ميكروسكوپ فلوئورسانس است لذا قبل از آوردن نمونه حتماً آن را با ميكروسكوپ فلوئورسانس چك كنيد. نمونه بافتی بايد به صورت كاملاً شفاف و حداكثر با ضخامت 20 ميكرون تهيه شود. نمونه بافتی و سلولی (پس از رنگ‌آميزی) باید در محيط مایع (آبی) حاوی آن به آزمايشگاه منتقل شود. نمونه سلولی (سلول‌های چسبنده) باید روی cover slip کشت داده شوند. در مورد سلول‌های suspended باید نمونه در داخل یک میکروتیوب قرار گیرد. از آب‌بندی كردن (seal) نمونه بين لام و لامل جداً خودداری فرمائيد. از زدن گليسيرين يا ساير مواد مشابه به نمونه جداً خودداری فرمائيد. برای حفظ کیفیت رنگ فلوئورسانس، ظرف حاوی نمونه را در داخل فویل آلومینیومی یا در فضای تاریک به آزمایشگاه منتقل کنید. جهت رسیدن به عکس دلخواه توصیه می‌شود مقاله‌ای كه حاوی عكس كانفوكال از نمونه‌ی مشابه شما باشد همراه داشته باشید.

درباره آنالیز

میکروسکوپ کانفوکال Confocal

آنالیز میکروسکوپ روبشی هم کانون لیزری یا کانفوکال (confocal microscope)، از دسته میکروسکوپ های فلوئورسانس است که در آن از خاصیت فلوئورسانس نمونه به منظور تشکیل تصویر و عکس برداری از آن استفاده می شود. میکروسکوپ کانفوکال امروزه توجهات بسیاری را به خصوص در حوزه پزشکی و زیست فناوری به خود جلب کرده است. چنانچه جایزه نوبل شیمی سال ۲۰۱۴ به محققین به دلیل تولید دستگاه کانفوکال با وضوح بالا اهدا شد. نمونه مناسب به منظور تصویربرداری با آنالیز میکروسکوپ کانفوکال و یا کلیه میکروسکوپ های فلوئورسانس باید فلوئورسنت باشد.

تکنیک های متعددی برای تولید نمونه فلوئورسنت وجود دارد. مرسوم ترین تکنیک، لیبل کردن یا نشاندار کردن نمونه با یک رنگ فلوئورسنت است. برای سلول ها و نمونه های زیستی می توان از بیان یک پروتئین فلوئورسنت استفاده است. البته اگر خود نمونه دارای خاصیت ذاتی فلوئورسنت داشته باشد، مستقیماْ می توان از آن تصویربرداری کرد. رنگ‌های فلوئورسنت زیادی برای ایجاد خاصیت فلوئورسنت (اصطلاحا رنگ آمیزی) در ترکیبات زیستی وجود دارد. این رنگ‌ها مولکول‌هایی می باشند که خاصیت ذاتی فلوئورسنت دارند. این رنگ به ترکیبات زیستی چسبیده و خاصیت را به کل سیستم می دهند. تعدادی از رنگ‌ های مرسوم عبارتند از DAPI، Hoechst، DRAQ5 و DRAQ7. در زیر تصاویری گرفته شده با میکروسکوپ کانفوکال (confocal) نشان داده شده است.

میکروسکوپ کانفوکال در مقایسه با دیگر میکروسکوپ های فلوئورسانس توانایی بخش بندی نوری وجود دارد که در نتیجه تصاویر فلوئورسانس، وضوح بهتری دارند. میکروسکوپ کانفوکال درحقیقت روشی اپتیکی برای تصویربرداری است که رزولوشن و کنتراست اپتیکی تصویر را افزایش می‌دهد. به ‌طوری که با قرار دادن pinhole در صفحه‌ی کانونی، نورهای خارج از فوکوس حذف می‌شود. این قابلیت به میکروسکوپ کانفوکال این اجازه را می‌دهد تا با اسکن کردن نمونه در عمق‌های متفاوت، تصویری از ساختار سه‌بعدی نمونه را تشکیل دهد.

همچنین این روش از میکروسکوپی به افزایش رزولوشن تصویر به‌خصوص در راستای عمق نمونه کمک می‌کند. میکروسکوپ موجود علاوه ‌بر میکروسکوپی به روش کانفوکال، قابلیت میکروسکوپی فلوئورسانس و میکروسکوپی میدان روشن را نیز دارد. از قابلیت‌های این دستگاه امکان نفوذ به اعماق نمونه با رزولوشن و کنتراست بالا، امکان عکس‌برداری به‌صورت لایه‌ای (Z-Scan) و امکان تشکیل تصویر سه‌بعدی از ساختار نمونه است.

در مهامکس این خدمت به صورت ساعتی انجام خواهد گرفت. نکات لازم جهت آماده سازی نمونه را در بخش نکات لازم مشاهده کنید.