آزمون چرخه سلولی با فلوسایتومتری

آزمون چرخه سلولی با فلوسایتومتری

یکی دیگر از کاربردهای دستگاه فلوساتومتری، محاسبه محتوی DNA سلولی و آنالیز چرخه سلولی است. با مطالعه محتویات DNA سلول ها می توان به نقص در تعداد کروموزوم های سلول یا جایگاه آن در چرخه سولی پی برد. در این روش به منظور اندازه گیری محتویات DNA سلول ها از طریق رنگ های فلورسنس رنگ آمیزی می کنند. این کار با استفاده از رنگ آمیزی با PI یا DAPI صورت می پذیرد. از این طریق مقدار دقیقی از محتوای DNA به ما نشان داده می شود. قرار گرفتن سلول ها بر حسب مقدار فلورسنس تولید شده یا در حقیقت شدت پالس ایجاد شده در آشکارساز است که بر حسب مقدار DNA در فازهای G1=2n و S>2n و G2/M=4n قرار می گیرد. در حقیقت از طریق تفسیر هیستوگرام محتوای DNA سلولی می توان سلول ها را در سه فاز اصلی سلولی (G1, S, G2/M) بررسی نمود.

تقسیم سلولی در سیکلی که دارای نقاط چک و بررسی است صورت می پذیرد و دارای ۴ مرحله اصلی است. این مراحل عبارتند از: فاز G1، سنتز یا فاز S، فاز G2 و فاز میتوز یا M. فاز G1 فاز رشد سلول ها است. عموما سلول ها در این فاز اند و روند طبیعی خود را طی می کنند. مقدمات همانند سازی DNA نیز در همین فاز صورت می پذیرد. در فاز S بخش DNA سلول همانند سازی می گردد و دوبرابر می شود تا پس از تقسیم شدن به میزان برابر DNA به سلول جدید برسد. در فاز G2 مواد و ترکیبات لازم برای تقسیم شدن هسته تامین می شوند و در نهایت سلول به دو سلولی دختر تقسیم می شود. در شکل زیر مراحل تقسیم سلولی و چک پوینت ها نشان داده شده است.

تکنیک مطالعه چرخه سلولی با فلوسایتومتری، تمرکز بر کمی کردن محتوای درون سلول ها و عموما DNA و دیگر ملکول های مربوط به چرخه سلولی همانند CDK و یا سایکلین ها دارد. این ترکیبات تنظیم کننده فرآیند تقسیم سلولی اند. به عنوان مثال با فعال شدن CDK فرآیند میتوز فعال می گردد. برخی رنگ ها مانند PI به DNA سلول  ماصل می شوند. پس DNS ها از این طریق در دستگاه یک سیگنال ایجاد می کنند. بنابراین فلورسانس ساطع شده در این روش به میزان محتوای DNA وابسته است. از این رو نمی توان مابین دو فاز G2 و M تمایز ایجاد نمود. تفسیر ها در خصوص دیگر ترکیبات مانند CDK و یا سایکلین ها بسیار پیچیده است.

به صورت کلی از طریق تکنیک چرخه سلولی می توان به اطلاعات گوناگونی دست یافت. اندازه گیری ها می توانند تک نقطه ای یا با گذشت زمان با تایم لپس باشند. چنانچه می توان درصد سلول ها را در فازهای گوناگون بدست آورد که در مواد گوناگون مانند سلول های سرطانی تفسیر خاص خود را دارند.