شمارش باسیلوس سرئوس به روش شمارش کلنی

شمارش باسیلوس سرئوس به روش شمارش کلنی

باسیلوس سرئوس یک باکتری گرم مثبت، هوازی یا بی­هوازی اختیاری، تشکیل دهنده هاگ، متحرک، بیماری زا و فرصت طلب است. این باکتری در حضور اکسیژن قادر به تولید اندوسپورهای مقاوم است. اندوسپورهای باسیلوس سرئوس در برابر گرما، تشعشع، مواد ضدعفونی کننده و خشک شدن مقاوم هستند و ویژگی چسبندگی آنها باعث اتصال آنها به تجهیزات و مقاومت در برابر  تمیز کردن می­شود. باسیلوس سرئوس به وفور در محیط و پوشش گیاهی یافت می­شود. استفراغ و اسهال دو شکل مسمومیت غذایی این باکتری است. این باکتری قابلیت رشد در محدوده دمایی وسیعی (8 تا 55 درجه سانتی گراد) را دارد.

شمارش کلنی از رایج­ترین روش­های شمارش باسیلوس سرئوس در مواد غذایی انسانی، خوراک دام و نمونه­های در تماس با مواد غذایی است. کلنی به اجتماع قابل مشاهده و متمرکز توده میکروبی در سطح محیط کشت گفته می­شود. بنابراین این اطلاعات فقط مربوط به باکتری­های زنده می­باشد. در شمارش استاندارد کلنی، حجم کمی (1/0 – 0/1 میلی لیتر) از نمونه حاوی تعداد نامعلومی از باکتری ها روی سطح یک پلیت آگار پخش می شود. پلیت های پخش شده در مدت زمان و دمای مشخصی در گرماخانه قرار می­گیرد. در این حین هر سلول باکتریایی زنده تکثیر شده و یک کلنی به راحتی قابل مشاهده تشکیل می‌دهد. سپس تعداد کلنی‌ها شمارش شده و تعداد کل سلول های زنده به دست آمده از این روش به صورت تعداد واحدهای تشکیل دهنده کلنی (CFU) گزارش می شود. باید توجه داشته داشت که نمونه­ها معمولا حاوی تعداد زیادی سلول هستند که نمی­تواند کلنی­های آنها را مستقیما شمارش کرد. از اینرو اغلب حجم مشخصی از رقت­های سریالی نمونه اصلی تهیه شده و کشت داده می­شود. پلیت با تعداد 30 تا 300 کلنی، موردی ایده­آل برای شمارش است. باسیلوس سرئوس، کلنی­های بزرگ صورتی با هاله رسوب­دار در سطح محیط کشت ایجاد می­کند. برای بررسی کلنی­های شاخص از آزمون همولیز استفاده می­شود. در این آزمون، ابتدا چند کلنی­ها در محیط MYP انتخاب و خالص­سازی شده، سپس به سطح آگار خوندار انتقال می­یابد. پس از گرمخانه­گذاری، تشکیل هاله کاملا شفاف در اطراف کلنی نشانه همولیز بتا و مثبت بودن کلنی است. تمامی شرایط انجام آزمون براساس استاندارد ملی 2324 است.