شمارش اشرشیاکلی به روش MPN

شمارش اشرشیاکلی به روش MPN

اشریشیاکلی (ای­کلای) باکتری بی هوازی اختیاری و جز فلور نرمال روده انسان و حیوانات خونگرم محسوب می شود. این باکتری عضوی از خانواده انتروباکتریاسه است که شامل بسیاری از جنس­ها از جمله پاتوژن­های شناخته شده مانند سالمونلا، شیگلا و یرسینیا می­باشد. اگرچه بیشتر سویه‌های ای­کلای به عنوان پاتوژن در نظر گرفته نمی‌شوند، اما می‌توانند پاتوژن‌های فرصت‌طلبی باشند که باعث عفونت در میزبان‌ها با سیستم ایمنی ضعیف شوند. همچنین گونه‌های بیماری‌زای ای­کلای وجود دارد که در صورت بلعیدن، باعث بیماری‌های گوارشی در انسان‌های سالم می‌شود.

در این آزمون از روش بیشترین تعداد احتمالی (MPN) برای شمارش ای­کلای استفاده می­شود. روش بیشترین تعداد احتمالی (MPN) یک روش آماری مبتنی بر نظریه احتمال است. این روش یک تکنیک مهم برای تخمین جمعیت میکروبی در خاک، آب، ماتریس های غذایی و محصولات کشاورزی است، به ویژه زمانی که تعداد میکروارگانیسم­ها کمتر از 10 گرم یا میلی لیتر نمونه باشد. روش MPN روش بهتری نسبت به شمارش کلنی­ها است زیرا لوله های محیط مایع فقط برای حضور یا عدم رشد مشاهده می­شوند. دقت این روش بیشتر از شمارش کلنی است و نتایج آن قابل مقایسه با نتایح بدست آمده در آزمایشگاه­های دیگر است. روش بیشترین تعداد احتمالی تعداد کل میکروبی را نشان می­دهد. همچنین گروه­های میکروبی خاص را می توان با استفاده از محیط­های انتخابی و افتراقی مناسب نشان داد.

 در روش MPN، محیط مایع در چندین لوله برای هر یک از رقت­های نمونه تهیه می­شود. پس از تلقیح نمونه، لوله ها در دمای مناسب در گرمخانه قرار می­گیرند. پس از گرمخانه­گذاری، تعداد لوله­ها مثبت برای هر رقت با مشاهده رشد (کدورت) و تشکیل گاز در لوله­ها تعیین می شود. مقدار MPN از جدول MPN به دست می آید و تعداد کلیفرم­ها از فرمولی که برای این تکنیک استفاده می­شود محاسبه می­گردد. جداول MPN آماری برای تکرارهای 3، 5 و 10 لوله از هر رقت موجود است. هرچه تعداد لوله های تکراری بیشتر استفاده شود، دقت تخمین اندازه جمعیت باکتری بیشتر است. تمامی اطلاعات مربوط به انجام آزمون (نوع محیط کشت و شرایط گرمخانه­گذاری)، جداول MPN و فرمول محاسبه شمارش ای­کلای براساس استاندارد ملی 2946 است.